提取外泌体先看这两种方法

Exosome （外泌体）是活细胞分泌的直径约为 30-150 nm 的膜性囊泡，天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液和母乳。Exosome 携带了包含细胞溶质蛋白、 参与细胞内信号转导的蛋白、各种代谢酶、热休克蛋白和四跨膜蛋白及特殊蛋白质，参与细胞活动的重要调控，有望成为多种疾病的早期诊断标志物。 Exosome 在作为基因和药物运载、肿瘤肿瘤和肿瘤生物学研究方面已经成为热点。

GSTM Exosome Isolation Reagent 是用于快速高效地从血清血浆、细胞培养上清、脑脊液和尿液中提取 exosome 的试剂盒，仅需通过简单混匀和常规离心即可从样本中获取大量 结构完整的 exosome，比传统的超速离心法节省时间和样本。以 GSTMExosome Isolation Reagent 提取的 exosome 可根据实验目的用于后续多种实验，应用范围广泛。

■ 优势

1. 操作简单，无需超速离心，省时省力； 

2. 纯度高，富集量大，应用范围广； 

3. 获取的 Exosome 结构和功能完整； 

4. 稳定性好，便于运输，便于保存。

GSTM Exosome Isolation Kit（柱提式）应用了柱提式的提取分离技术，一步法分离出血浆 / 血清 / 细胞上清液中的外泌体，调节结合条件后，外泌体被吸附在柱子的膜上，而杂质不被吸附而去除。柱子经洗涤后去除杂质，最后洗脱出外泌体。得到的外泌体可用于 WB、质谱、QPCR 检测、高通量测序等实验。

■ 优势

1. 操作简易：不需要超速离心，分离时间小于 1 小时；

2. 高得率：分离的外泌体颗粒量可媲美超速离心；

3. 分离高纯度的外泌体：外泌体纯度 >95%；

4. 分离的外泌体形态完整。

■ 本试剂盒分离的外泌体鉴定

根据国际细胞外囊泡协会于 2014 年发表的一个指导手册（MISEV），鉴定外泌体首先需要通过 WB 来鉴定细胞外囊泡的标志蛋白是否存在于样品中，通过电子显微镜来观察样品中细胞外囊泡的形态特征，通过 NTA 等手段来分析样品中细胞外囊泡的群体特征（粒子浓度、直径分布等）。

外泌体 WB 检测（本试剂盒与 PEG 原理的试剂盒对比）

Western Blot 进行外泌体鉴定，CD9 条带清晰可见。本试剂盒提取的外泌体蛋白检测条带单一，纯度比 PEG 原理的提取试剂盒更高。

外泌体电镜检测

电镜结果显示，外泌体呈囊泡状，粒径大小约为 120 nm，与文献中报道的 30-150 nm 一致。

外泌体粒径检测

Nanosight 进行粒径检测，粒径均一，平均粒径为 128 nm ，与文献报道相符。