如何正确培养这几种细胞

细胞培养的过程大概是这样的：失败—成功—体味—收获—思考—交流，你到了哪个阶段？不妨和我们一起来看看养细胞的那些事。

一、昆虫细胞培养体会

养了快一年的昆虫细胞了， 而且最近又在做昆虫血液的原代培养， 积累了点点经验， 说出来大家共勉。

首先， 要广泛阅读细胞培养方面的专业书籍， 打造自己扎实的专业基础， 为以后的操作做准备。 这方面的书有很多，「体外培养的原理与技术」， 薛庆善主编， 科学出版社；「细胞实验指南」，D.L. 斯佩克特，ets 著， 黄培堂等译；「细胞培养」， 司徒镇强等。

其次， 每种细胞的培养条件都不相同， 别人的经验和书本上的 protocal 都只能作为参考， 真正重要的是自己培养过程中的不断摸索， 这就需要对自己培养过程中细胞出现的状况作详细记录， 随时总结。

再次， 培养要有极大的耐心， 过程中的影响因素又很多， 这又是细活， 其过程需要考虑各种影响因素， 当出现问题时一一加以排除， 找到最佳解决方案。 我在这里没有讨论细胞培养的细节问题， 因为那样的话是说不完的。

二、纤维细胞培养经验

曾经在自己制作的无细胞真皮上养过成纤维细胞， 无细胞真皮是按照文献的方法制作的， 把成纤维细胞接种到无细胞真皮上的方法也是按书和文献中的方法。 可是很奇怪， 成纤维细胞怎么都不长， 我重复了好多次， 结果都是失败。

后来又做了对照， 同样的条件， 一个平皿中直接接种成纤维细胞， 另一个平皿中放入无细胞真皮， 再接种成纤维细胞， 结果， 没有无细胞真皮的平皿中细胞长得很好。

这样说明不是细胞和平皿的问题， 那么问题在哪里呢？ 我苦思了很久， 觉得是不是无细胞真皮在处理的过程中用到了一些化学药品， 对细胞的生长有害。

可是在接种细胞以前我已经按文献上的方法将无细胞真皮用 DMEM 培养液浸泡了 48 小时， 在后来的实验中我就将浸泡的时间延长， 并在中间每天换浸泡液一次， 经过 5 天的浸泡以后， 成纤维细胞的接种最终成功了。

这份迟到的成功提醒我， 对于书和文献上的东西， 不能不信， 也不能全信， 很多东西还得靠自己在实验中摸索。

三、悬浮细胞培养经验

（１） 无菌操作是一切技术的基础， 切记此条。

（２）在细胞状态好时， 乘胜追击， 准备好一切所需要的细胞原料。

实验同时需要采用 FCM 检测药物干预后细胞周期的改变， 需要做 THC，Werstern Blot，RT－PCR 等时， 可以现将细胞处理好后， 根据不同的实验步骤， 保存细胞标本， 然后各个击破， 这样可以减少实验时间。

如要收集不同浓度点和时间点的标本， 细胞处理后， 部分用来做流式测周期 （固定那步可以放置 －２０ 度数日， 待标本收集全后一起检测）。 部分用来细胞涂片 （固定后， 可以放 -20 度数月， 本人曾放置 3 月没影响）。

部分用来做 Werstern Blot（将细胞离心呈粉末状置 -80 度保存， 或者提取蛋白变性后保存， 粉末保存时间可达 2 月）。 部分用于提取 RNA 时， 可现加上 Trizol 混匀后， 置 -80 度保存。

原料准备好后， 在根据自己的时间进行合理安排， 多出时间查阅文献。

（３）在进行每个实验时， 一定要找到该实验的详细的 Protocal， 一步一步踏踏实实的完成， 一般都会得到比较理想的结果。

四、如何防止细胞污染

每个人都担心细胞被污染， 每个人都有碰到自己的细胞被污染。

比较重要的几点如下：

东西一定要用自己的。 既不要借别人的， 也不要借给别人。 可能大家觉得比较自私。 实际上还是很有好处的。 并不是每个人的操作都规范， 因此相互之间串着用， 很容易造成交叉污染。

我习惯口对口倒液体， 在倒前倒后都要在酒精灯上过一下。 自己认为比起用吸管吸更能很好的防止污染。 步骤越简单， 越能防止污染， 而且还能节省很多吸管。

一次将所有的所需要试剂、工具放入工作台。 不要做到半路， 又出工作间拿东西， 这样增加了污染的机会。

整个操作要快、动作要轻、而且不要干其他的事情。

一般开紫外线照射台的时候， 就将培养基、酶、DTHANKS 液拿到室外让它自然升温。 这样 40 分钟后， 温度也升上来了。 有很多人将他放到 37 度水浴锅里加热。 一定要注意水浴锅的卫生， 有的常年不清洗， 里面很脏， 容易在外面瓶身上吸附大量细菌。 因此用它的也一定要勤换水。 从水浴锅拿出后， 最好找个毛巾插干上面的水。

操作前要洗手， 用 75%酒精搽手。用完操作台， 要打扫卫生。

细胞要经常冻存， 一般只要细胞状态好就将细胞冻存起来。 细胞状态差了， 扔掉， 重新复苏。 这是一个必须养成的习惯。

转自丁香园上各位站友的小心得